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選擇離子交換層析填料后需要注意這幾個(gè)方面

更新時(shí)間:2022-12-22 點(diǎn)擊次數(shù):796
   離子交換層析填料由基架和配基組成,填料的性質(zhì)主要由配基決定。
 
  確定離子交換方式:
  樣品一般在中性pH值的環(huán)境中保持較好的活性,在進(jìn)行離子交換層析時(shí),所用buffer的pH值需偏離樣品等電點(diǎn)1個(gè)pH值以上。在交換方式的確定環(huán)節(jié),常規(guī)選擇目標(biāo)物質(zhì)結(jié)合到離子交換層析填料上,而雜質(zhì)流穿的模式,洗脫時(shí)收集目標(biāo)物。但也可以選擇目標(biāo)物質(zhì)為不結(jié)合填料的流穿模式,使雜質(zhì)結(jié)合到填料上,同樣可以達(dá)到目標(biāo)物質(zhì)與雜質(zhì)分離的目的。
 
  所用bufferpH值高于樣品等電點(diǎn)時(shí),樣品帶負(fù)電,一般用陰離子交換的方式進(jìn)行物質(zhì)的分離;所用buffer的pH值低于樣品的等電點(diǎn)時(shí),樣品帶正電,一般用陽(yáng)離子交換的方式進(jìn)行物質(zhì)的分離。
 
  選好離子交換層析填料后,在實(shí)際的使用中還需要注意以下幾個(gè)方面:
  上樣前需將樣品置換到平衡緩沖液中,在樣品體積相對(duì)柱體積來(lái)說(shuō)較大時(shí),這一點(diǎn)尤其重要;
 
  柱子載量和要達(dá)到的分辨率決定上樣量。如果想達(dá)到較好的分辨率,建議上樣量為柱子載量的30%;
 
  實(shí)際載量受樣品大小和形狀的影響,同時(shí)填料孔徑,流速,樣品濃度,pH/蛋白帶電性、離子強(qiáng)度等均會(huì)影響載量;
 
  添加合適的去垢劑:添加離子型去垢劑時(shí),應(yīng)避免加入的去垢劑與填料配基結(jié)合而影響填料的結(jié)合載量。

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