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【干貨分享】色譜定量方法介紹

更新時(shí)間:2022-06-07 點(diǎn)擊次數(shù):3210
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色譜分析的重要作用之一是對(duì)樣品進(jìn)行定量,色譜定量的依據(jù)是:組分的重量或濃度與檢測(cè)器的響應(yīng)信號(hào)成正比。選擇合適的定量方法時(shí),除需要考慮相對(duì)定量還是絕對(duì)定量外,同時(shí)也需要考察化合物的線性響應(yīng)范圍、是否有合適內(nèi)標(biāo)、是否有標(biāo)準(zhǔn)品等。常見(jiàn)的定量方法有內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法、面積歸一法、加校正因子的主成分自身對(duì)照法與不加校正因子的主成分自身對(duì)照法等。本文將對(duì)zui常用的內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法、面積歸一法三種方法進(jìn)行介紹。

內(nèi)標(biāo)法

內(nèi)標(biāo)法是將一定重量的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物加到一定量的被分析樣品混合物中,根據(jù)測(cè)試樣和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比及其相應(yīng)的色譜峰面積之比及相對(duì)校正因子,來(lái)計(jì)算被測(cè)組分的含量。

精密稱(量)取對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì),分別配成溶液,各精密量取適量,混合配成校正因子測(cè)定用的對(duì)照溶液。取一定量進(jìn)樣,測(cè)量對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積,計(jì)算校正因子。

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再取按標(biāo)準(zhǔn)制備中含內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液,進(jìn)樣,測(cè)量供試品中待測(cè)成分和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積,再計(jì)算含量(其中Ax:供試品圖中待測(cè)成份峰面積;A`S: 供試品圖中內(nèi)標(biāo)物峰面積;C`S:供試品圖中內(nèi)標(biāo)物濃度)。

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內(nèi)標(biāo)物的選擇要求:

 

a

 

原樣品中不含組分;

 

b

 

與待測(cè)物保留時(shí)間應(yīng)接近,但不重疊;

 

c

 

為高純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),或含量已知物質(zhì);

 

d

 

在給定色譜條件下具有一定化學(xué)穩(wěn)定性。

外標(biāo)法

外標(biāo)法是用待測(cè)組分的純品作對(duì)照物質(zhì),以對(duì)照物質(zhì)和樣品中待測(cè)組分的響應(yīng)信號(hào)相比較進(jìn)行定量的方法。它不是把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加入到被測(cè)樣品中,而是在與被測(cè)樣品相同的色譜條件下單獨(dú)測(cè)定,把得到的色譜峰面積與被測(cè)組分的色譜峰面積進(jìn)行比較求得被測(cè)組分的含量。此法可分為外標(biāo)一點(diǎn)法與標(biāo)準(zhǔn)曲線法。

標(biāo)準(zhǔn)曲線法:是用對(duì)照物質(zhì)配制一系列濃度的對(duì)照品溶液確定工作曲線,求出斜率、截距。在*相同的條件下,準(zhǔn)確進(jìn)樣與對(duì)照品溶液相同體積的樣品溶液,根據(jù)待測(cè)組分的信號(hào),從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度,或用回歸方程計(jì)算,工作曲線法也可以用外標(biāo)二點(diǎn)法代替。

外標(biāo)一點(diǎn)法:是用一種濃度的對(duì)照品溶液對(duì)比測(cè)定樣品溶液中組分的含量。

精密稱(量)取對(duì)照品和供試品,配制成溶液,分別精密稱取一定量,進(jìn)樣,測(cè)量對(duì)照品溶液和供試品溶液中待測(cè)物質(zhì)的峰面積(或峰高)來(lái)進(jìn)行計(jì)算:

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如標(biāo)準(zhǔn)中有系統(tǒng)適用性要求,首先需確認(rèn)系統(tǒng)溶液能滿足條件,否則檢測(cè)無(wú)效。一般要求對(duì)照品配制兩份,一份連續(xù)進(jìn)5針以計(jì)算RSD,如無(wú)特殊要求,RSD不超過(guò)2%。符合了,說(shuō)明系統(tǒng)沒(méi)問(wèn)題,再進(jìn)行后面的實(shí)驗(yàn)。樣品也同樣需要配制兩份,兩份樣品最終結(jié)果的RSD同樣不能超過(guò)2.0%。

面積歸一法

由于組分的量與其峰面積成正比,按各品種項(xiàng)下的規(guī)定,配制供試品溶液,取一定量進(jìn)樣并記錄色譜圖,測(cè)得各峰的峰面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積,計(jì)算各峰面積占總峰面積的百分比。

計(jì)算公式:

總雜(%)=1-主成分峰面積百分比

單雜峰直接從積分結(jié)果表中讀取即可

此法結(jié)果很不準(zhǔn)確,一般在工藝研究、原料合成過(guò)程中的中間體等中用來(lái)檢測(cè)大致數(shù)據(jù)做參考用。

 

 

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