在使用色譜柱之前，好對(duì)色譜柱的功能進(jìn)行測(cè)試，并將測(cè)試結(jié)果保存下來，作為今后評(píng)估色譜柱功能變化的參考。柱函數(shù)測(cè)試應(yīng)根據(jù)色譜柱工廠報(bào)告中的條件(工廠試驗(yàn)中使用的條件為佳條件)進(jìn)行，只要測(cè)量結(jié)果具有可比性。然而，應(yīng)該注意的是，柱的功能可能會(huì)因樣品、活性相、柱溫度和其他使用條件的不同而有所不同。
1、樣品的前處理
好運(yùn)用活動(dòng)相溶解樣品。
預(yù)處理柱用于去除樣品中的強(qiáng)極性或柱填料的不可逆吸附。
采用0.45μm濾膜去除顆粒雜質(zhì)。
2、活動(dòng)相的制造
液相色譜是指樣品組分在柱填料和活性相之間進(jìn)行質(zhì)量交換以達(dá)到分離的目的，因此活性相必須具有以下特性：
答：活性樣品相對(duì)于樣品具有一定的溶解性，這可以確保樣品成分不會(huì)被存放在柱中(或在柱中保存很長時(shí)間)。
活性相和樣品不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。
為了獲得良好的分離效果，活性相的粘度應(yīng)盡可能??；降低塔的壓降，延長泵的使用壽命(可采用遞升溫法降低活性相的粘度)。
活性相的物理化學(xué)性質(zhì)應(yīng)與所使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。優(yōu)選地使用低紫外吸收的溶劑來使用紫外檢測(cè)器。
即活化相的沸點(diǎn)不能太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，不能進(jìn)行試驗(yàn)。
在生產(chǎn)活動(dòng)階段后，必須對(duì)其進(jìn)行脫氣處理。去除活性相中溶解的微量氣體不僅有利于檢測(cè)，而且可以防止微量氧對(duì)樣品的活性相的影響。
3。運(yùn)動(dòng)相速度的選擇是柱內(nèi)運(yùn)動(dòng)相線速度的函數(shù)，采用不同的流速可以得到不同的柱效應(yīng)。對(duì)于特定的液相柱，為了找到的柱效，好采用佳的流速。對(duì)于內(nèi)徑為4.6mm的液相色譜柱，流速為1ml/min，內(nèi)徑為4.0mm時(shí)，流速為0.8mL/min。 當(dāng)選用流速時(shí)，剖析時(shí)刻或許延伸。改變流動(dòng)相洗滌強(qiáng)度的方法可以縮短分析時(shí)間(例如，在使用反相柱時(shí)，可以適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。
試驗(yàn)前，活性水相的制備效果好，特別是在夏季使用緩沖溶液作為活性相時(shí)。
流動(dòng)相要求使用0.45μm的濾膜來去除顆粒雜質(zhì)。
運(yùn)用HPLC級(jí)溶劑制造活動(dòng)相，運(yùn)用適宜的活動(dòng)相可延伸液相色譜柱的運(yùn)用壽數(shù)，進(jìn)步柱功能。
