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液相色譜柱的分類(lèi)、選擇

更新時(shí)間:2020-08-27 點(diǎn)擊次數(shù):8106
  液相色譜柱的分類(lèi)(按色譜固定相基質(zhì)分)
 
  1.硅膠基質(zhì):
 
  1.1反相色譜柱:
 
  反相色譜填料常是以硅膠為基礎(chǔ),表面鍵合有極性相對(duì)較弱的官能團(tuán)的鍵合相。反相色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng),通常為水,緩沖液與甲醇,已腈等混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)組合先被沖出,而極性弱的組份會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等。
 
  1.2正相色譜:
 
  正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica),以及其他具有極性官能團(tuán),如胺基團(tuán)(NH2,APS)和氰基團(tuán)(CN,CPS)的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其他團(tuán)的極性較強(qiáng),因此,分離的次序是依據(jù)樣品中的各組份的極性大小,即極性強(qiáng)弱的組份先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對(duì)比固定相低,如:正乙烷(Hexane),,二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
 
  1.3離子交換色譜柱:
 
  以磺化交聯(lián)強(qiáng)陰/陽(yáng)離子鍵合硅膠色譜柱,常用規(guī)格:強(qiáng)陰離子色譜柱(SAX),強(qiáng)陽(yáng)離子交換色譜柱(SCX)
 
  2.聚合物基質(zhì):
 
  聚合物調(diào)料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要優(yōu)點(diǎn)是在PH值為1~14均可使用。相對(duì)與硅膠基質(zhì)的C18填料,這類(lèi)填料具有更強(qiáng)的疏水性;大孔的聚合物填料對(duì)蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。現(xiàn)在的聚合物填料的缺點(diǎn)是相對(duì)硅膠基質(zhì)填料,色譜柱柱效較低。
 
  所有聚合物基質(zhì)在流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)都會(huì)出現(xiàn)膨脹或收縮。用于HPLC的高交聯(lián)度聚合物填料,其膨脹和收縮要有限制。溶劑或小分子容易滲入聚合物基質(zhì)中,因?yàn)樾》肿釉诰酆衔锘|(zhì)中的傳質(zhì)比在陶瓷性基質(zhì)中慢,所以造成小分子在這種基質(zhì)中柱效低。對(duì)于大分子像蛋白質(zhì)或合成的高聚物,聚合物基質(zhì)的效能比得上陶瓷性基質(zhì)。因此,聚合物基質(zhì)廣泛用于分離大分子物質(zhì)。
 
  色譜柱的選擇
 
  液相色譜儀基質(zhì)的選擇大致遵循以下法則,硅膠基質(zhì)的填料被用于大部分的HPLC分析,尤其是小分子量的被分析物,聚合物填料用于大分子量的被分析物質(zhì),主要用來(lái)制成分子排阻和離子交換柱。
 
  色譜柱在使用前,建議進(jìn)行柱的性能測(cè)試,并將結(jié)果保存起來(lái),作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。在做柱性能測(cè)試時(shí)要按照色譜柱出廠(chǎng)報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠(chǎng)測(cè)試所使用的條件是較佳的條件),只有這樣,測(cè)得的結(jié)果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同。
 
  色譜柱的維護(hù)
 
  1. 色譜柱的平衡
 
  反相色譜柱由工廠(chǎng)測(cè)試后是保存在乙腈/水中的。新柱應(yīng)先使用10-20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。請(qǐng)一定確保您分析樣品所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶。每天用足夠的時(shí)間以流動(dòng)相來(lái)平衡色譜柱,您就會(huì)在處理問(wèn)題方面獲得大的“補(bǔ)償“。
 
  2. 色譜柱的再生
 
  長(zhǎng)期使用的色譜柱,往往柱效會(huì)下降(柱子的理論塔板數(shù)減低)??梢詫?duì)色譜柱進(jìn)行再生,在有條件的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用一個(gè)廉價(jià)的泵進(jìn)行柱子的再生。建議用來(lái)沖洗柱子的溶劑體積。

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