各位小伙伴在做實驗過程中通常會遇到各種奇奇怪怪的問題，其中色譜峰出現(xiàn)雙峰可以說是經(jīng)常會遇見的一類問題。遇見雙峰了該怎么去解決呢，這里聽小編慢慢道來。

HPLC分析中，在色譜柱正常，樣品靈敏度足夠，分析方法合適，色譜峰在出峰時間較短的條件下（不包括梯度），峰型應(yīng)對稱而尖銳。但是，在對樣品了解程度不夠，方法不妥，樣品處理方法及進樣方式不合理下，會出現(xiàn)各種意想不到的問題，而對色譜峰難以作出合理的解釋，尤其對于新手更是如此。色譜雙峰指的是一種物質(zhì)，但在色譜圖中出現(xiàn)雙峰，這種情況分為四種原因。

1.色譜柱堵塞或污染

 如果你分析樣品時發(fā)現(xiàn)每個色譜峰都出現(xiàn)雙峰（出峰越快，出現(xiàn)雙峰的可能性越少），尤其采用單一純物質(zhì)時，可以判定色譜柱出問題（柱頭受損或柱頭固定相變臟或流失）。如果進樣量少，原來色譜柱正常，色譜峰的形狀多為一大峰帶一小峰，不一定拖尾，這一般應(yīng)是柱頭端堵塞，將色譜柱反接沖洗維護，一般情況下可以解決。如果峰拖尾，雙峰強弱相差不大，柱頭填料受污染或鍵合相流失可能性更大，這時可以對色譜柱維修處理或者使用新的色譜柱，維修建議交由廠家處理。

2.溶劑極性及進樣量不合適

許多小伙伴對此可能不以為然，一般的書籍和文獻都不會提到這方面的內(nèi)容，而這確是雙峰產(chǎn)生的一個很重要的原因。目前HPLC分析多為反相色譜，流動相多為甲醇、乙腈、水，以及各種添加劑以改善分離性能。樣品一般用與流動相相溶的溶劑溶解，溶解方法是用流動相溶解，但是很多情況是不一致的。當(dāng)用極性強度大的試劑做溶劑時，如純甲醇、純乙腈，純乙醇，而分析體系中以水為主，樣品進樣量大，如20ul，單一的純物質(zhì)出雙峰，第二峰比第yi峰小（每次都不太一樣），且拖尾，保留時間會提前（相對進樣量少而言），將進樣量減少一半以上，峰型將變?yōu)檎?。這是樣品的溶劑與流動相極性相差太大，而流動相來不及將其稀釋達到平衡造成的。

另一個原因是，進樣量不一定大，但濃度很大，色譜圖上的雙峰緊靠在一起，基本上齊高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是色譜柱問題）。將樣品稀釋再進樣就可以了，這是由于進樣量過大，色譜柱過載造成的。

3.樣品的特性和PH值不了解

有些樣品由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)的特點，存在互變異構(gòu)現(xiàn)象，而這種互變異構(gòu)體無法分開，而是以一個動態(tài)平衡存在。在色譜分析時，在一個特定的條件下，一種物質(zhì)將出現(xiàn)雙峰，甚至三峰。這時一般雙峰靠的很近，基本齊高，不拖尾，條件稍一變化，尤其改變pH，雙峰現(xiàn)象將消失。

pH對峰形的影響在緩沖液流動相平衡過程中非常明顯，當(dāng)連續(xù)進樣時，受pH的連續(xù)變化影響會經(jīng)常遇到這種雙峰的情況。另外，在樣品分析時，流動相的pH盡量遠(yuǎn)離被分析物的等電點，否則也容易引起雙峰的產(chǎn)生。在用離子對試劑分析時，選擇不好條件也會容易引起雙峰的產(chǎn)生。

4.儀器參數(shù)設(shè)置不合理

參比波長設(shè)置錯誤，例如設(shè)置分析波長254nm，參比波長400nm，這個對于大多數(shù)化合物可能沒影響。但是如果被測化合物，在400nm處也有強的紫外吸收，比254nm更高。這樣其出峰時，由于背景的抵扣作用，本來一個峰會變成對稱的二個峰，而且如果將二峰之間的峰谷反轉(zhuǎn)180度，恰好是一個完整的峰。這時要將參比波長設(shè)置更大，或者取消。

以上就是小編給各位小伙伴整理的出現(xiàn)雙峰的原因和對應(yīng)解決方案，高效液相色譜是一套非常精密的分析系統(tǒng)，一旦出現(xiàn)異常峰形需要認(rèn)真排查原因，找到合適解決方案。各位小伙伴若還有任何疑問，歡迎咨詢我們的當(dāng)?shù)劁N售或經(jīng)銷商。